|
|
Contribution of gag region to overall HIV replicative fitness in patients with different disease progression
Suchý, Tomáš ; Weber, Jan (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent)
Virus lidské imunodeficience (HIV) je celosvětově rozšířen a bez možnosti vyléčení. Kvůli své celoživotní přítomnosti je virus pozorně sledován společně s imunologickým stavem pacienta. Replikační zdatnost viru je jedním z důležitých aspektů, které mohou být brány v potaz při sledování HIV. V této práci měříme replikační zdatnost HIV pomocí gag rekombinantních virů a srovnáváme výsledky s replikační zdatností změřenou s použitím primárních izolátů. Dále srovnáváme naše poznatky o změně replikační zdatnosti v čase s vývojem nemoci u pacienta. Zjistili jsme, že gag může být hlavním přispěvatelem k celkové zdatnosti, ovšem ne ve všech případech. Dále jsme pozorovali korelaci vývoje replikační zdatnosti a vývoje počtu CD4+ T buněk u pacienta. Tento vztah byl patrnější u pacientů, které řadíme mezi pomalé progresory nebo u pacientů, kteří mají některou z protektivních alel. Souhrnem, naše výsledky posouvají dále porozumění replikační zdatnosti a její role v progresi nemoci a připravují cestu k použití rekombinantního HIV pro měření replikační zdatnosti v klinické praxi. Klíčová slova: HIV, replikační zdatnost, rekombinantní virus, progrese nemoci HIV, gag
|
|
|
Contribution of gag region to overall HIV replicative fitness in patients with different disease progression
Suchý, Tomáš ; Weber, Jan (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent)
Virus lidské imunodeficience (HIV) je celosvětově rozšířen a bez možnosti vyléčení. Kvůli své celoživotní přítomnosti je virus pozorně sledován společně s imunologickým stavem pacienta. Replikační zdatnost viru je jedním z důležitých aspektů, které mohou být brány v potaz při sledování HIV. V této práci měříme replikační zdatnost HIV pomocí gag rekombinantních virů a srovnáváme výsledky s replikační zdatností změřenou s použitím primárních izolátů. Dále srovnáváme naše poznatky o změně replikační zdatnosti v čase s vývojem nemoci u pacienta. Zjistili jsme, že gag může být hlavním přispěvatelem k celkové zdatnosti, ovšem ne ve všech případech. Dále jsme pozorovali korelaci vývoje replikační zdatnosti a vývoje počtu CD4+ T buněk u pacienta. Tento vztah byl patrnější u pacientů, které řadíme mezi pomalé progresory nebo u pacientů, kteří mají některou z protektivních alel. Souhrnem, naše výsledky posouvají dále porozumění replikační zdatnosti a její role v progresi nemoci a připravují cestu k použití rekombinantního HIV pro měření replikační zdatnosti v klinické praxi. Klíčová slova: HIV, replikační zdatnost, rekombinantní virus, progrese nemoci HIV, gag
|
|
|
Study of the cleavage kinetics of Gag polyprotein from HIV-1 virus by the viral proteinase
Krištofičová, Ivica ; Ingr, Marek (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Polyprotein Gag je prekurzorem strukturních proteinů viru HIV-1 nezbytných pro správné složení, pučení a zrání virové částice v průběhu životního cyklu viru HIV-1. Proces zrání do stádia infekčního virionu je závislý na štěpení polyproteinu Gag a GagPol virovou proteinasou na devíti přesně určených místech. Narušení tohoto štěpení je jedním z hlavních terapeutických cílů v léčbě nákazy HIV. Virus HIV-1 si však vytváří rezistenci k inhibitorům proteinasy vznikem mutací jak v proteinase samotné, tak v jejím substrátu. Štěpení Gagu HIV-1 proteinasou je proces s přesně daným pořadím a rychlostí jednotlivých kroků. Předchozí biochemické studie stanovily kinetické parametry těchto procesů s pomocí oligopeptidů reprezentujících přirozeně se vyskytující štěpicí místa. Tato práce popisuje štěpení samotného polyproteinu Gag, který je přirozeným substrátem HIV-1 proteinasy. Za tímto účelem byl rekombinantně připraven kompletní polyprotein Gag v bakteriálním expresním systému. Bylo provedeno jeho štěpení HIV-1 proteinasou a produkty tohoto štěpení byly analyzovány pomocí SDS-PAGE a Western blotu. Dále byla porovnána substrátová specifita proteinasy divokého typu a mutované varianty HIV-1 proteinasy vůči kompletnímu divokému typu Gag polyproteinu. Byly pozorovány podstatné rozdíly mezi rychlostmi jednotlivých kroků...
|
host ::
RSS.